Cos'è western blotting?

Il western blotting è una tecnica di laboratorio che viene utilizzata per rilevare specifiche proteine in una miscela complessa. È una delle metodologie più comuni utilizzate in biologia molecolare e biochimica.

Il processo del western blotting prevede la separazione delle proteine in un campione mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide, in cui le proteine sono separate in base alle loro dimensioni. Dopo l'elettroforesi, le proteine vengono trasferite su una membrana di nitrocellulosa o di PVDF (polivinilidene difluoruro).

La membrana viene quindi trattata con anticorpi specifici che riconoscono la proteina di interesse. Gli anticorpi primari si legano alla proteina, mentre gli anticorpi secondari, che sono coniugati con un segnale rilevante, come un enzima o una fluorescenza, si legano agli anticorpi primari. Questo permette di rilevare e misurare la presenza delle proteine di interesse.

Il western blotting può essere utilizzato per determinare la presenza, la quantità e le modifiche post-traduzionali delle proteine in un campione. È particolarmente utile nello studio delle interazioni proteina-proteina e nello stabilire la struttura e la funzione delle proteine.

Il western blotting è una tecnica versatile che può essere applicata in una vasta gamma di settori, tra cui la ricerca medica, lo sviluppo di farmaci, la scoperta di biomarcatori e la diagnostica clinica. È una metodologia molto sensibile, ma richiede un'attenta preparazione del campione e la selezione di anticorpi specifici per ottenere risultati accurati e affidabili.